蛋白組學(xué)分析，是蛋白質分析的(de)一(yī)項非常重要的(de)技術，一(yī)般會使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS。許多蛋白質和(hé)肽極其微量，需要質譜儀的(de)高(gāo)靈敏度檢測才能發現，而這就需要一(yī)個非常穩定的(de)前端HPLC支持此微量檢測。
Prominence nano系列是一(yī)套納升LC系統，可(kě)在納升流量下進行精準流速的(de)溶劑輸送。按照應用不同，可(kě)以配置成1D和(hé)2D系統。
Prominence nano具備納升流速下的(de)高(gāo)保留時間重複性，非常低(dī)的(de)系統死體積和(hé)極低(dī)的(de)交叉污染等特點。
基本性能
· 納升流速傳感器可(kě)保證精确的(de)納升溶劑傳輸
· RFC系統大大降低(dī)溶劑消耗
· 低(dī)容量納升閥---保證了低(dī)的(de)系統死體積
· 高(gāo)靈敏度分析
納米輔助控制軟件的(de)直觀操作
· 圖形界面直觀操作
· 可(kě)視(shì)化監控儀器運行狀态
· 二維參數的(de)便捷設置
蛋白質組分析的(de)應用
· 高(gāo)保留時間重複性
· 二維LC的(de)高(gāo)分辨率
納升流速傳感器可(kě)保證精确的(de)納升溶劑傳輸
LC-20AD nano采用了新的(de)RFC技術,可(kě)對每一(yī)個泵進行獨立的(de)流速控制，在納升流速下保證好的(de)流量精度。專利的(de)RFC系統是由高(gāo)精度的(de)納升流速感應器控制，确保在任何時間精準的(de)流速測量。同時，流量傳感器配置了精确的(de)溫度控制機制，以最大程度減少不确定的(de)環境因素對溶劑輸送的(de)影響。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的(de)流速穩定性，在300nL/min時候保留時間重複性的(de)RSD小于0.2%。
RFC系統的(de)原理(lǐ)
泵內(nèi)配置了一(yī)個流速傳感器，可(kě)持續監測泵輸出的(de)納升流速。為(wèi)了保證流速在設定的(de)範圍內(nèi)，輸液泵采用反饋控制模式，傳感器的(de)監測到真實流速後可(kě)以自(zì)動調整分流比例，從而保證流速的(de)準确性。另外，分流後的(de)流動相在混合前就經過回流管路回到溶劑瓶，不會浪費溶液。
低(dī)溶劑消耗
RFC系統可(kě)确保每個泵輸出的(de)溶劑分流後又回到流動相瓶中。就算在高(gāo)壓梯度分析中，兩種溶劑在分離(lí)後并不會像廢棄物一(yī)樣排出，從而降低(dī)溶劑消耗并減少對環境的(de)影響。
FCV納升閥，低(dī)死體積
FCV nanoFCV納升閥體積為(wèi)25nL，在納升範圍內(nèi)幾乎不會展寬。在納升LC使用捕集柱進樣和(hé)二維系統中，FCV 納升閥是不可(kě)或缺的(de)。FCV 納升閥通過使用強化的(de)定子(zǐ)和(hé)聚醚醚酮的(de)轉子(zǐ)，可(kě)以大大降低(dī)樣品的(de)吸附，同時獲得很好的(de)耐用性。
高(gāo)靈敏度分析
SIL-20ACSIL-20AC的(de)直接進樣功能與FCV納升閥的(de)低(dī)擴射性能相結合可(kě)實現微量體積樣品的(de)進樣分析。FCV納升閥後連接的(de)捕集柱可(kě)以對進樣的(de)樣品進行捕集濃縮，從而實現高(gāo)靈敏度分析。而且，SIL-20AC被公認為(wèi)交叉污染最低(dī)的(de)自(zì)動進樣器，這些特征都可(kě)以滿足高(gāo)靈敏度MS分析的(de)要求。
2維LC的(de)輔助控制軟件
輔助控制軟件可(kě)對2維LC進行便捷設置，在軟件圖形界面上可(kě)輕松對2維HPLC的(de)進行複雜梯度編程，設定流速等，然後生成方法文件并下載至儀器中進行控制，而圖形化的(de)流路圖和(hé)梯度曲線代表當前狀态。簡便的(de)設置可(kě)避免單獨使用LC控制軟件帶來的(de)一(yī)系列的(de)操作問題。
Prominence nano 2D系統在線的(de)結合了離(lí)子(zǐ)交換和(hé)反向色譜模式（如(rú)下圖所示），每種色譜模式都獨立運行，兩種模式的(de)結合可(kě)進行最有效的(de)分離(lí)。Prominence nano 2D系統可(kě)與配備Nano ESI源的(de)LCMS系統聯用進行濕法蛋白組學(xué)分析，也可(kě)以與點靶儀和(hé)MALDI-TOF質譜聯用進行幹法蛋白組學(xué)分析。
易操作的(de)一(yī)維體系
Nano-Assist一(yī)維LC設置圖1D 納升LC系統對于确認SDS PAGE分離(lí)前的(de)蛋白質十分有效，1D系統隻需要非常簡單的(de)操作就可(kě)以實現。當然，輔助控制軟件在1D和(hé)2D系統中使用都是十分方便的(de)。
高(gāo)保留時間重複性
蛋白質組分析需要比較不同樣本的(de)色譜峰差異，而樣本中又存在許多特征相似的(de)多肽，對保留時間的(de)重複性要求非常高(gāo)。Prominence nano系統的(de)高(gāo)重複性可(kě)保證蛋白質組分析的(de)高(gāo)精數據，配置了RFC系統的(de)LC-20AD nano可(kě)以在流速為(wèi)300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的(de)保留時間重複性。
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的(de)重複性
2維 LC的(de)高(gāo)分辨率
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的(de)重複性在蛋白質組學(xué)分析時，單一(yī)的(de)1D反相分離(lí)不足以提供足夠的(de)色譜峰容量；所以，為(wèi)了實現複雜樣品的(de)分離(lí)，需要進行2D分離(lí)以保證足夠的(de)峰容量。Prominence nano系統可(kě)以進行2D分析，結合陽離(lí)子(zǐ)交換和(hé)反相模式，為(wèi)蛋白質組學(xué)分析提供所需的(de)核心技術。下圖為(wèi)200fmol酵母蛋白質的(de)分析圖，1D分離(lí)中的(de)未分離(lí)組分在2D中繼續分離(lí)成幾個組分，2D分離(lí)的(de)峰容量大大大于1D所獲得的(de)效果。
分析條件
一(yī)維
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流動相 | 甲酸铵緩沖液
濃度STEP梯度 |
流速 | 40 nL/min |
捕集柱 | (5 mmL.×300 m I.D.)
L-column （micro） |
捕集時長(cháng) | 5分鍾 |
脫鹽溶劑 | 水/蟻酸=100/0.1 |
脫鹽流速 | L/min |
脫鹽時長(cháng) | 5分鍾 |
2維
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 m I.D.) |
流動相 | 梯度洗脫
A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 600nL/min |
溫度 | 溫度 |
檢測 | LCMS-IT-TOF |
樣本 | 酵母蛋白中的(de)蛋白
（相當于200 fmol的(de)） |
* 分别利用1維和(hé)2維中不同類型的(de)柱體進行其他組合的(de)分離(lí)模式也是可(kě)行的(de)。在這種情況下，分離(lí)或檢測方法由于使用的(de)移動相分離(lí)模式或類型之間的(de)相互作用，可(kě)能會有一(yī)些限制。
連接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系統不僅僅可(kě)以通過nano ESI接口連接LCMS使用，還可(kě)連接到配有自(zì)動點靶儀的(de)MALDI-TOFMS儀器。為(wèi)了準确分析MALDI靶的(de)每個色譜峰，需要LC能夠在1nL到1µL範圍之內(nèi)精确控制流速，Prominence nano系統的(de)完全滿足了此需要。
酶解BSA樣品的(de)UV色譜圖（500fmol）
分析條件
檢測器 | UV220 nm |
柱 | MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
(250 mmL. × 100 µm I.D.) |
流動相 | 1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脫 |
流速 | 1 µL/min |
溫度 | 環境溫度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
點靶間隔 | 12 秒的(de)點斷
每點液體：200nL（不包括基質） |